問(wèn):用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移,有時(shí)發(fā)生快速變化,原因何在?如何解決?
答:關(guān)于漂移問(wèn)題:
1溫度控制不好,解決方法是采用恒溫裝置,保持柱溫恒定
2流動(dòng)相發(fā)生變化,解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等
3柱子未平衡好,需對(duì)柱子進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的平衡
關(guān)于快速變化問(wèn)題
1流速發(fā)生變化,解決辦法是重新設(shè)定流速,使之保持穩(wěn)定
2泵中有氣泡,可通過(guò)排氣等操作將氣泡趕出。
3流動(dòng)相不合適,解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合
問(wèn):色質(zhì)聯(lián)用中毛細(xì)柱的選擇應(yīng)注意什么問(wèn)題?
答:1柱效要高
2熱穩(wěn)定性好
3化學(xué)惰性強(qiáng)
具體選擇應(yīng)注意:
1柱極性。根據(jù)分析樣品選擇不同極性的柱子進(jìn)行分析
2柱子內(nèi)徑。內(nèi)徑大小決定柱容量
3液膜厚度。分析樣品溫度一不一樣,對(duì)膜厚有不同要求,溫度高液膜要厚,溫度低液膜要薄
4柱長(zhǎng)度。柱越長(zhǎng),柱效越高,分離效果越好,但也存在吸附問(wèn)題,柱子過(guò)長(zhǎng),分析時(shí)間長(zhǎng),因此要根據(jù)樣品考慮柱子長(zhǎng)度
5外涂層(柱體)的選擇
6另外還有儀器型號(hào)、分析對(duì)象等因素
問(wèn):液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?
答:1篩板堵塞或柱失效,解決辦法是反向沖洗柱子,替換篩板或更換柱子。
2存在干擾峰,解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子,改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子
問(wèn):從那些方面可以簡(jiǎn)單判別毛細(xì)管柱子的熱穩(wěn)定性好壞?
答:1分配容量(或容量因子)K,好的柱子在高溫運(yùn)行后,分配容量K不應(yīng)有明顯的下降,否則,說(shuō)明柱子的熱穩(wěn)定性不好。
2理論塔板數(shù)n,熱穩(wěn)定性好的柱子經(jīng)受高溫后,理論塔板數(shù)應(yīng)基本保持恒定
3柱子的極性。熱穩(wěn)定性好的柱子,高溫前后極性變化不大,具體表現(xiàn)為保留指數(shù)I值沒(méi)有大的變化。
4噪聲。熱穩(wěn)定性好的柱子在高溫下使用后,噪聲不能增加.
5柱子的去活層,毛細(xì)管柱子涂固定液前內(nèi)部一般要用去活性試劑去活以增加惰性。質(zhì)量好的毛細(xì)管柱子高溫后,去活層不應(yīng)該變化,表現(xiàn)在對(duì)強(qiáng)極性樣品或酸堿性樣品的吸附性不能增加。
問(wèn):為什么進(jìn)樣器內(nèi)的玻璃襯套會(huì)對(duì)色譜行為造成影響?
答:進(jìn)樣器內(nèi)的玻璃襯套主要有下列作用:
1提供一個(gè)溫度均勻的汽化室,防止局部過(guò)熱。
2玻璃的惰性不如不銹鋼好,減少了在汽化期間樣品分解的可能性。
3易于拆換清洗,以保持清潔的汽化室表面,一些痕量非揮發(fā)性組分會(huì)逐漸積累殘存于汽化室,高溫下會(huì)慢慢分解,使基流增加,噪聲增大,通過(guò)清洗玻璃襯套可以消除這種影響。
4可根據(jù)需要選擇管壁厚度及內(nèi)徑適宜的玻璃襯套,以改變汽化室的體積,而不用更換整個(gè)進(jìn)樣加熱塊。從以上幾個(gè)方面可以知道玻璃襯套對(duì)色譜行為造成影響的原因。
問(wèn):毛細(xì)管色譜分流進(jìn)樣時(shí),非線性分流的主要原因是什么?
答:1進(jìn)樣器溫度太低,樣品汽化不*,發(fā)生分級(jí)分流。
2進(jìn)樣器溫度太高,某些組分可能發(fā)生熱分解,也有的樣品可能發(fā)生催化分解,或樣品部分地被吸附在進(jìn)樣器內(nèi)表面上。
3在分流點(diǎn)以前樣品沒(méi)有混合均勻或混合不充分。
4系統(tǒng)的進(jìn)樣墊,柱接頭等地方漏氣。
問(wèn):HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
答:1樣品量不足:解決辦法為增加樣品量
2樣品未從柱子中流出:可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子
3樣品與檢測(cè)器不匹配:根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器
4檢測(cè)器衰減太多:調(diào)整衰減即可。
5檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大:解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)
6檢測(cè)器池窗污染:解決辦法為清洗池窗。
7檢測(cè)池中有氣泡:解決辦法為排氣。
8記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng):調(diào)整電壓范圍即可。
9流動(dòng)相流量不合適:調(diào)整流速即可。
10檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線:解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器,重作校正曲線。
問(wèn):做HPLC分析時(shí),柱壓不穩(wěn)定,原因何在?如何解決?
答:原因可能有:
1泵內(nèi)有空氣,解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣,對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理;
2比例閥失效,更換比例閥即可。
3泵密封墊損壞,更換密封墊即可。
4溶劑中的氣泡,解決的辦法是對(duì)溶劑脫氣,必要時(shí)改變脫氣方法;
5系統(tǒng)檢漏,找出漏點(diǎn),密封即可。
6梯度洗脫,這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。
問(wèn):做PGS/MS分析時(shí),如何防止焦油狀污染物進(jìn)入毛細(xì)柱?
答:聚合物,尤其是一些含氮、硫及鹵素的高分子裂解時(shí),常有焦油狀物質(zhì)產(chǎn)生。為防止這種焦油狀物質(zhì)進(jìn)入毛細(xì)柱造成污染而使柱性能下降,可采用保護(hù)預(yù)柱,即在裂解器與毛細(xì)柱之間接一填充預(yù)柱,通過(guò)控制預(yù)柱溫度而使焦油狀物質(zhì)滯留在預(yù)柱內(nèi),預(yù)注可置于GC氣化室內(nèi),這樣既容易控制溫度,又減少系統(tǒng)的死體積,當(dāng)然,預(yù)柱填料需經(jīng)常更換。
問(wèn):我zui近更換了另一種牌號(hào)的ODS柱,雖然分離情況仍可以,但保留時(shí)間不能重現(xiàn),為什么?
答:這是因?yàn)楸环治鑫锟赡芫哂行纬蓺浣〉哪芰Α1M管過(guò)去幾年來(lái),填料的制造技術(shù)有了極大的提高,但不同的廠商的ODS填料表面硅醇基的濃度不同。正是這些硅醇基可能與樣品發(fā)生相互作用。因此,同一被分析物中的各組分在不同牌號(hào)的ODS柱上的相對(duì)保留時(shí)間就可能不同。在流動(dòng)相中加入少量競(jìng)爭(zhēng)物,如三乙基胺(TEA),將會(huì)使硅醇基的成鍵能力飽和,從而保證不同牌號(hào)柱子上的相對(duì)保留時(shí)間具有較好的重現(xiàn)性。
問(wèn):我購(gòu)買(mǎi)的HPLC柱驗(yàn)收測(cè)試時(shí)柱壓過(guò)高,請(qǐng)問(wèn)為什么?
答:柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶(hù)zui常碰到的問(wèn)題。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題,您可按下面步驟檢查問(wèn)題的起因。
1拆去保護(hù)柱,看柱壓是否還高,否則是保護(hù)柱的問(wèn)題,若柱壓仍高,再檢查;
2把色譜柱從儀器上取下,看壓力是否下降,否則是管路堵塞,需清洗,若壓力下降,再檢查。
3將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上,用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子,(此時(shí)不要連接檢測(cè)器,以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)性)。這時(shí),如果柱壓仍不下降,再檢查;
4更換柱子入口篩板,若柱壓下降,說(shuō)明你的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì),正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高,請(qǐng)與廠商。一般情況下,在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過(guò)濾器便可避免柱壓過(guò)高的問(wèn)題,SGE提供的Rheodyne 7315型過(guò)濾器就是解決這一問(wèn)題的*選擇。
問(wèn):高溫毛細(xì)柱的使用壽命一般為多長(zhǎng)?
答:毛細(xì)柱壽命除決定于柱子本身的性能外,在很大程度上取決于使用情況,比如使用溫度、樣品狀態(tài),進(jìn)樣量等,如果在其使用溫度范圍內(nèi),樣品干凈,色譜柱不被污染的情況下,柱子壽命一般在2—3年之間。
問(wèn):如毛細(xì)管柱被污染,柱效和分辨率降低,有何方法使它恢復(fù)?是否可通過(guò)老化來(lái)解決?
答:根據(jù)柱污染程度可采取不同的方法來(lái)解決,如果污染不嚴(yán)重,污染物沸點(diǎn)不是太高,可通過(guò)老化來(lái)解決,但老化溫度不可超過(guò)柱子的zui高使用溫度,且一般要較長(zhǎng)時(shí)間(8—30小時(shí)),如果污染較嚴(yán)重,或通過(guò)老化仍不能使柱性能恢復(fù),那就必須采用溶劑清洗,通常是用5倍柱容積的溶劑(如正戊烷,二氯甲烷等)通過(guò)色譜柱。當(dāng)然,清洗溶劑用的越多,對(duì)柱性能的損壞越大,清洗完后,在通載氣老化一定時(shí)間,如果柱性能恢復(fù),便可繼續(xù)使用。必須指出:只有交聯(lián)柱才能清洗,對(duì)于非交聯(lián)柱,清洗柱會(huì)*失效,因?yàn)楣潭ㄒ罕幌吹袅?,至于清洗用溶劑的選擇,可參考說(shuō)明書(shū)。
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